驱白巴布期片对小鼠免疫功能有什么影响

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更新时间:2024-01-03
驱白巴布期片对小鼠免疫功能有什么影响

【摘要】目的 探讨驱白巴布期片对小鼠免疫功能的影响。方法 观察驱白巴布期片对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠脾脏和胸腺的重量、Con A和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化、腹腔巨噬细胞吞噬功能以及血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的影响。结果 驱白巴布期片高、中、低剂量治疗组均可明显提高小鼠免疫器官脾、胸腺的重量,可提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,可促进脾脏B、T淋巴细胞的增殖,可以显著降低免疫抑制小鼠血清免疫球蛋白IgG,IgA,lgM含量。结论 驱白巴布期片对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的非特异性免疫(巨噬细胞吞噬功能)和特异性细胞免疫(脾脏淋巴细胞的增殖)等功能都有上调作用,说明驱白巴布期片对免疫功能有显著的调节作用。

驱白巴布期片为传统的治疗白癜风的维吾尔药物,从维吾尔医理论出发驱白巴布期片是通过调节人体内的四种“赫立特”的平衡、通脉、理血从而达到治疗白癜风的目的。然而,现代医学研究白癜风的发病机制目前尚不清楚,存在多种假说,其中大量资料表明白癜风的发病与自身免疫有关。但驱白巴布期片对机体免疫功能影响的相关研究方面仍属空白。鉴于此,本实验研究从非特异性免疫(巨噬细胞吞噬功能)及特异性细胞免疫(脾淋巴细胞增殖)两个方面进行研究。

1 材料

1.1 药材与试剂 复方驱白巴布期片(由新疆华康制药公司提供,批号:20070123)。环磷酰胺,200 mg/支,(江苏恒瑞医药股份有限公司生产,批号:20070328);盐酸左旋咪唑片(山东省莒南制药厂,批号:20070123);RPMI1640培养液(GIBCO公司);四甲基偶氮噻唑蓝(MTr,美国Sigam公司);刀豆蛋白(ConA,美国Sigam公司);脂多糖(LPS,美国Sigam公司);小牛血清(杭州四季清生物公司);淀粉肉汤;5%鸡红细胞混悬液[自制:取鸡血用生理盐水经1 500 r/rain,离心5 rain,洗涤3次,配制成5%( V/V)鸡红细胞混悬液]。

1.2 仪器 CO:培养箱,全自动酶标仪,全自动生化分析仪,电子分析天平,显微镜等。

1.3 动物昆明小鼠,120只,雄性(20±2)g,由新疆自治区疾病控制中心实验动物中心提供。

2 方法

按完全随机化设计方案,将120只小鼠分为12组,每组10只,再将12组动物分为A、B两部分,每部分6组,具体分组及给药操作:正常对照组,灌胃以生理盐水;模型组;阳性对照组,每天灌胃以左旋咪唑;驱白巴布期混悬液高剂量组;驱白巴布期混悬液中剂量组;驱白巴布期混悬液低剂量组。每组动物,正常饮食饮水。阳性对照组每天给左旋咪唑0.25 mg/(10 g·d);配制6.5%的驱白巴布期片混悬液,高剂量组小鼠灌胃2次/d,0.3 ml/次;中剂量组小鼠灌胃2次/d,0.2 rnl/次;低剂量组小鼠灌胃1次/d,0.2 ml/次;正常对照组和模型组灌胃生理盐水0.2 ml。除正常对照组外,其余5组于实验开始日一次性予以腹腔注射环磷酸胺(300 mg/),诱导建立小鼠免疫功能低下模型。连续给药10 d。

3 结果

3.1 对小鼠体重及脾脏重量及免疫球蛋白IgC,IgM,IgA的影响 A部分小鼠末次用药后禁食,于末次给药后24 h处死A组小鼠,取脾,取胸腺,称重,计算脾脏、胸腺指数(mg/l0g体重),并摘眼球取血,分离血清用于测定免疫球蛋白IgG,IgM,IgA。数据进行组间t检验。

3.2 对小鼠淋巴细胞增殖作用的影响(MTT法) 取上述A部分小鼠秤过体重后,用75%酒精浸泡5rain,无菌操作取脾,称重后,放人装有5 ml Hankerg液的平皿中,用200目钢网研磨过筛,制成细胞悬液。取出100µl用于计数。将其余细胞悬液移入离心管中,离心1 500 r/rain,5 min,弃去上清,用完全1640培养液稀释,制成1.0×107/ml的脾细胞悬液,细胞培养采用96孔培养板,每孔加入脾细胞悬液100µl,平行3个复孔,然后加入使得孔最终浓度为5 g/ml的脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(Con A)液10 l,同时做不加Con A、LPS的阴性对照孔,37°C,5%CO2培养箱中培养48 h,于培养结束前4 h加入MTr,每孔10µl (5mg/m1),培养结束后,弃上清液后每孔加入100µl二甲基亚矾(DMSO)裂解液,吹打混匀,用全自动酶标仪在490 nm处测定每孔OD值。

3.3 腹腔巨噬细胞吞噬功能实验 B组小鼠于实验第l0天末次给药后1 h,给各组小鼠腹腔内注射淀粉肉汤1 ml/只,1h后每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液1.0 ml。于注射鸡红细胞后2 h,将小鼠脱颈椎处死仰卧位固定于鼠板上,经腹腔注射生理盐水1.0 ml,轻轻按摩小鼠腹部l min,然后剪开腹壁,抽取小鼠腹腔洗液滴于2张干净的载玻片上,每片0.2 ml涂片。将涂片置于恒温37°C孵育箱中温育40 min,使载玻片上腹腔洗液干燥。干燥后用乳头吸管抽取生理盐水轻轻冲洗,以洗去未贴片的细胞,晾干,95% 乙醇中固定15 rain,用吉姆萨一瑞氏液染色15 min,用蒸馏水轻轻冲洗,晾干。在显微镜下每片计数100个巨噬细胞,计数已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞个数。按下列公式计算每鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。数据进行组间t检验。

吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞。

4、讨论

胸腺是T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官,脾脏则是体内最重要的外周免疫器官,也是T,B淋巴细胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场所,它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关,在免疫功能低下时常有胸腺、脾脏萎缩,体积变小。实验结果提示,在环磷酰胺对小鼠形成免疫抑制的实验条件下,驱白巴布期片能使实验动物胸腺重量增加,高剂量使脾脏重量增加更为显著。巨噬细胞是一类几乎参与一切免疫反应的细胞,在调节淋巴细胞功能和免疫应答上的重要作用已为人们所重视,其主要功能包括分解各种异物并与之相互作用、刺激和增进淋巴细胞的免疫活性。实验结果显示驱白巴布期片可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用。