1 仪器与试药

岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10AVP检测器；sartorius电子天平；KQ-100型超声波清洗器；甲醇为色谱纯试剂，其他试剂为分析纯；没食子酸对照品（批号为11083-200302，供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所）；克银丸。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含28.5μg的溶液。

2.2 供试品溶液的制备 取克银丸50粒，研细，取1g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3 色谱条件

2.3.1 测定波长的选择 取没食子酸对照品溶液，在200~400nm波长处进行扫描，结果在274nm波长处具有最吸收，故选择274nm作为检测波长。

2.3.2 系统适应性试验 色谱柱：Diamansil C18（250mm×4.6mm,5μl）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（8：92）；柱温35℃；流速：0.8ml/min；测定波长：274nm。根据上述色谱条件，取供试品与对照品溶液，进样量10μl，理论塔板，按没食子酸峰计算应不得低于3000（N=6435，计算机给出）。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20μl，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程为Y=7244.5＋1860542.982X（r=1.0000）。表明没食子酸进样量在0.1140~0.5700μg内，呈良好的线性关系。

2.4.2 阴性对照试验 按供试品溶液的制备方法制成不含拳参药材的阴性对照溶液，吸取该溶液10μl，注入液相色谱仪中，在与没食子酸相应保留时间处，无干扰峰出现。

2.4.3 稳定性试验 取对照品溶液在0、5、10、15、20h，分别进样10μl，按没食子酸峰面积计，峰面积平均值为528217，RSD为0.3%，结果未发生明显变化。

2.4.4 精密度试验 取对照品溶液10μl，重复进样5次，没食子酸峰面积的平均值为525360，RSD为0.4%。测定结果表明该方法的精密度良好。

2.4.5 重现性实验 取同批号（批号：040401）的样品按供试品溶液的制备方法平行制备5份，样品和对照品溶液各进样10μl，依法测定，样品中没食子酸含量的平均值为1.46mg/g，RS为0.7％，表明本方法重现性良好。

2.4.6 回收率试验 精密称取经同法测定，已知含量的同批号（批号：040401）样品5份，每份0.5g，再分别加入精密称取的没食子酸对照品适量，按供试品溶液的制备方法处理，样品和对照品溶液各进样10μl，依法测定，计算回收率，没食子酸的平均回收率为99.76％，RSD为0.5％。表明本方法准确可信。

2.4.7 样品测定 取5批克银丸样品，按供试品溶液的制备方法制备，样品和对照品溶液各进样10μl，依法测定，每批测定2次。没食子酸的平均含量。

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